hMTERF3 基因真核表达载体的构建与鉴定

›› 2017, Vol. 2 ›› Issue (8): 18-22.

hMTERF3 基因真核表达载体的构建与鉴定

（1. 大理大学基础医学院，云南大理671000；2. 大理大学第一附属医院生殖科，云南大理671000；
3. 大理大学大理教学医院呼吸内科，云南大理671000）

收稿日期:2017-01-04 修回日期:2017-01-21 出版日期:2017-08-15 发布日期:2017-08-15
作者简介:孙美涛，硕士研究生，主要从事细胞分子生物学研究.
基金资助:
国家自然科学基金资助项目（31601155；81560458）；云南省教育厅科学研究基金资助项目（2014Z126）；大理
大学大学生创新创业计划资助项目（CXCY-X-2016-18）；大理大学大学生科研基金资助项目（KYSX201609）

Construction and Identification of Eukaryotic Expression Vector of Human MTERF3

（1. Pre-clinical College, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China; 2. Department of Reproductive Medicine, The First Affiliated
Hospital of Dali University, Dali, Yunnan 671000, China; 3. Department of Respiratory Medicine, Dali Teaching Hospital of Dali
University, Dali, Yunnan 671000, China）

Received:2017-01-04 Revised:2017-01-21 Online:2017-08-15 Published:2017-08-15

摘要/Abstract

摘要：

目的：构建和鉴定带3×Flag标签的人线粒体转录终止因子3基因（hMTERF3）真核表达载体。方法：根据NCBI数据库
中hMTERF3 基因序列设计引物，采用聚合酶链式反应从pGEM-hMTERF3重组克隆载体中扩增出hMTERF3 基因开放阅读框
序列，经Hind Ⅲ和BamHⅠ双酶切后，连接入真核表达载体p3×FLAG-CMV-14的多克隆位点中，构建重组质粒p3×FLAGCMV-
hMTERF3，分别用菌落PCR、限制性核酸内切酶分析和DNA序列分析3种方法鉴定重组子。结果：重组质粒p3×FLAGCMV-
hMTERF3经双酶切鉴定和菌落PCR鉴定均获得大小为1 254 bp的目的条带，DNA序列分析和Blast序列比对结果表明
该序列与GenBank中hMTERF3 基因序列的同源性达到100%，插入基因的大小和方向均正确。结论：成功构建了hMTERF3 基
因的真核表达载体，为进一步研究hMTERF3基因在恶性肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。

关键词: 人线粒体转录终止因子3, 真核表达载体, 鉴定

Abstract:

Objective：To construct and identify the eukaryotic expression vector of FLAG-tagged human MTERF3 gene. Methods：
The human MTERF3 gene was amplified by Polymerase Chain Reaction（PCR）. The recombinant products of the p3×FLAG-CMVhMTERF3
were gained by T4 DNA ligase connecting MTERF3 gene fragment and eukaryotic expression vector p3×FLAG-CMV-14
with restriction enzymes Hind Ⅲ and BamHⅠ. The recombinant pasmid p3×FLAG-CMV-hMTERF3 were identified by colony PCR,
double restriction enzyme digest and DNA sequencing. Results：A specific band of 1 254 bp was detected from recombinant plasmid
p3×FLAG-CMV-hMTERF3 by digestion of Hind Ⅲ and BamHⅠ. The sequencing and identification showed that homology between
this sequence and the human MTERF3 gene sequence from GenBank was 100%, and the size and the direction of the inserted gene
were right. Conclusion：The eukaryotic expression vector of human MTERF3 was constructed successfully, which may lay the
foundation for a further study of the interaction mechanism between behavior of MTERF3 in tumor cells and its development.

Key words: human MTERF3, eukaryotic expression vector, identification

中图分类号:

孙美涛，梅雯，杨泽芳，丁小倩，张若鹏，张晓娟，熊伟. hMTERF3 基因真核表达载体的构建与鉴定[J]. , 2017, 2(8): 18-22.

Zhang Xiaocan, Duan Baozhong, Luo Dandan, Tao Aien, Li Yang. Construction and Identification of Eukaryotic Expression Vector of Human MTERF3[J]. , 2017, 2(8): 18-22.

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