美洲大蠊多肽ＰＡＥ2基于AMPK调控自噬逆转BEL-7402/5-FU多药耐药的体外研究

大理大学学报 ›› 2022, Vol. 7 ›› Issue (4): 1-7.

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美洲大蠊多肽ＰＡＥ2基于AMPK调控自噬逆转BEL-7402/5-FU多药耐药的体外研究

欧　玲，李彩琳，李银蕊，周杰，单婉歆，吴定宇，彭芳

（1. 大理大学药学院，云南大理　671000；2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南大理　671000；3.大理大学资产与实验室管理处，云南大理　671000）

收稿日期:2021-11-08 修回日期:2021-12-31 出版日期:2022-04-15 发布日期:2022-05-27
通讯作者: 彭芳，教授，E-mail： pengfang@aliyun.com。
作者简介:欧玲，硕士研究生，主要从事抗肿瘤药理学研究。
基金资助:
国家自然科学基金项目（81560600）；云南省地方本科高校（部分）基础研究联合专项资金项目（2017FH001-010）

In vitro Study on the Periplaneta americana Polypepticde PAE2 Reversing Multi-Drug Resistance of BEL-7402/5-FU Based on AMPK-Regulated Autophagy

Ou Ling， Li Cailin， Li Yinrui， Zhou Jie， Shan Wanxin， Wu Dingyu， Peng Fang

（1.College of Pharmacy， Dali University， Dali， Yunnan 671000， China； 2.Yunnan Provincial Key Laboratory of Entomological Biopharmaceutical R&D， Dali， Yunnan 671000， China； 3.The Asset and Laboratory Management Division， Dali University， Dali， Yunnan 671000， China）

Received:2021-11-08 Revised:2021-12-31 Online:2022-04-15 Published:2022-05-27

摘要/Abstract

摘要：

［摘要］目的：探究美洲大蠊多肽PAE2基于腺苷-磷酸活化蛋白激酶（AMPK）调节自噬对人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU多药耐药性的影响。方法：以人肝癌细胞株BEL-7402及人肝癌耐药细胞株BEL-7402/5-FU为研究对象，采用噻唑蓝（MTT）比色法测定AICAR的作用时间及浓度；酶联免疫吸附试验（ELISA）测定细胞中AMPK含量；实时聚合酶链式反应（real-time PCR）检测细胞中AMPK mRNA的表达水平；real-time PCR检测细胞中自噬相关蛋白5（ATG5）、自噬相关蛋白7（ATG7）、磷酸肌醇-3-激酶3（PIK3C3）、Beclin 1、微管相关蛋白1亲链3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）、P62、Zeste同源物增强子2（EZH2）等mRNA的表达水平；激光共聚焦显微镜观察细胞中LC3-Ⅱ的表达；免疫细胞化学法（ICC）检测细胞中P62蛋白的表达。结果：美洲大蠊多肽PAE2能够降低AMPK含量（P<0.05），也能降低ＡＭＰＫ mRNA的表达水平，显著降低自噬相关因子ATG5 mRNA、ATG7 mRNA、PIK3C3 mRNA、Beclin 1 mRNA、LC3-Ⅱ mRNA的表达水平（P<0.05），明显提高P62 mRNA及EZH2 mRNA的表达水平（P<0.05），增加P62蛋白的表达（P<0.05）。结论：美洲大蠊多肽PAE2能够通过下调AMPK的表达进而抑制自噬来逆转BEL-7402/5-FU细胞的多药耐药性。

关键词: font-family:宋体, ">［关键词］"> , font-family:宋体, ">美洲大蠊多肽；腺苷">-font-family:宋体, ">磷酸活化蛋白激酶；自噬；多药耐药性

Abstract:

〔Abstract〕 Objective： To investigate the effects of the Periplaneta americana polypeptide PAE2 on the multi-drug resistance of BEL-7402/5-FU cells based on adenosine monophosphate-activited protein kinase（AMPK） regulation of autophagy. Methods： Human hepatocellular carcinoma sensitive cell line BEL-7402 and human hepatocellular carcinoma drug-resistant cell line BEL-7402/5-FU were used as the research objects. The action time and concentration of AICAR were determined by methyl thiazolyl tetrazolium（MTT） colorimetry assay. AMPK content in cells was determined by enzyme linked immunosorbent assay （ELISA）. Real-time polymerase chain reaction （real-time PCR） was used to detect AMPK mRNA expression level in cells. Real-time PCR was used to detect the mRNA expression levels of autophagy related protein 5（ATG5）， autophagy related protein 7（ATG7）， phosphoinositide-3-kinase class 3（PIK3C3）, Beclin 1，microtubuler-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ（LC3-Ⅱ）， P62 and enhancer of Zeste homolog 2（EZH2）. The expression of LC3-Ⅱ was observed by laser scanning confocal microscope. The expression of P62 protein was detected by immunocytochemistry（ICC）. Results： Periplaneta americana polypeptide PAE2 can reduce the expression of AMPK and its mRNA， greatly reduce the expression of related autophagy proteins ATG5 mRNA， ATG7 mRNA， PIK3C3 mRNA， Beclin 1 mRNA， and LC3-Ⅱ mRNA（P<0.05）， and significantly increase the expression of P62 mRNA和EZH2 mRNA（P<0.05）， increase the expression of P62 protein（P<0.05）. Conclusion： Periplaneta americana polypeptide PAE2 can reverse the multi-drug resistance of BEL-7402/5-FU cells by inhibiting AMPK so as to inhibit autophagy.

Key words:

"> ">〔Key words">〕 Periplaneta americana polypeptide">； adenosine monophosphate-activited protein kinase">；autophagy">；multi-drug resistance

中图分类号:

欧　玲, 李彩琳, 李银蕊, 周杰, 单婉歆, 吴定宇, 彭芳. 美洲大蠊多肽ＰＡＥ2基于AMPK调控自噬逆转BEL-7402/5-FU多药耐药的体外研究[J]. 大理大学学报, 2022, 7(4): 1-7.

Ou Ling, Li Cailin, Li Yinrui, Zhou Jie, Shan Wanxin, Wu Dingyu, Peng Fang. In vitro Study on the Periplaneta americana Polypepticde PAE2 Reversing Multi-Drug Resistance of BEL-7402/5-FU Based on AMPK-Regulated Autophagy[J]. Journal of Dali University, 2022, 7(4): 1-7.

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美洲大蠊多肽ＰＡＥ2基于AMPK调控自噬逆转BEL-7402/5-FU多药耐药的体外研究

In vitro Study on the Periplaneta americana Polypepticde PAE2 Reversing Multi-Drug Resistance of BEL-7402/5-FU Based on AMPK-Regulated Autophagy

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